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仪器型号:美国安捷伦1290_qtof6550四级杆液质联用仪;美国Waters iclass-ab5500 lcms/ms;日本岛津30A;美国赛默飞U3000-Q-Exactive液质联用仪
测试周期:3-7个工作日
液质联用
液质联用(HPLC-MS)又叫液相色谱-质谱联用技术,它以液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离,被离子化后,经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补。
LCMS与LCMS/MS区别
LC-MS 和 LC-MS/MS 均适用于液相应用。
LC-MS可以通过收集质谱获得总离子色谱图。由于电喷雾电离是一种软电离源,因此光谱中通常很少或没有碎片,仅存在准分子离子。因此,它只能提供未知化合物的分子量信息,而不能提供结构信息。它很难用于定性分析,但可用于定量分析。但是,如果单级MS不与软电离源一起使用,而是与EI或类似源一起使用,则会有片段峰,这可以提供分子结构信息。
LC-MS/MS采用串联质谱,既能获得分子离子峰,又能获得碎片离子峰,适用于定性和定量分析。质谱法的突出特点是具有海量信息,可用于定性或提供一些定性基础(还需要其他定性仪器)。其次,质谱本身也具有分离效应,即根据质量进行分离。如果进行一次液相分离,LC-MS分离两次,LC-MS/MS分离三次,LC-MS3分离四次...(三个或更多阶段是离子阱质谱的特征)。
LC-MS和LC-MS/MS(或MS/MS)的区别在于,如果您对样品的主要成分感兴趣,并且它们是您已经知道的目标化合物,例如质量控制,检查有机合成的纯度,完整的农药分析工作,指导药物合成中的先导化合物(如果一锅中的所有内容都正确, 拍摄以查看合成是否正确)等,可以使用LC-MS。因为它便宜且易于操作。即使某些东西在液相中没有分离,只要您关心主要成分也没关系。可以调整液相条件,或者扫描图后直接查看提取的离子图,或者做SIM卡。在这些领域使用LC-MS/MS是浪费金钱。
但是如果您有兴趣:(1)未知事物,LC-MS不能用于定性分析,需要更多的片段信息;(2)混合物中的微量成分。需要LC-MS/MS:LC-MS/MS可以提供帮助您进行定性分析所需的更多片段信息。LC-MS/MS可以降低背景噪声,使微量成分的光谱不受丰富物质干扰的影响。LC-MS/MS可以降低很多背景噪声,使您的化合物的灵敏度大大提高,定量结果更好。
通常,LC-MS/MS用于质谱定量分析,而不是LC-MS。LC-MS中的UV可用于定量分析,但当UV吸收存在干涉峰时,UV吸收并不准确。LC-MS/MS使用母离子/子离子进行定量分析,相对不易受到干扰,精度更高。它广泛用于PK / TK应用程序。
MS/MS定量在质谱定量中已被广泛接受。这种定量通常通过三重四极杆或离子阱质谱法实现。
使用MS / MS的原因是许多化合物具有相同的质量。使用第一维单级质谱时LC-MS/MS 相对于 LC-MS 具有更高的灵敏度和选择性,因为它可以同时监测两个离子的相互作用,从而消除干扰和背景噪声。 此外,LC-MS/MS 还可以检测更多的目标化合物,因为它可以在两个 MS 步骤之间进行更加精细的质谱分离。
另外,需要注意的是,在进行 LC-MS 或 LC-MS/MS 实验时,需要根据样品的性质和所需的分析结果来选择合适的离子源、柱和质谱仪等参数,以确保获得准确、可重复的结果。
LC-MS 和 LC-MS/MS 都是非常有用的实验室检测工具,可以用于分析化合物的结构、定量和定性等方面。 它们之间的区别在于后者使用串联质谱技术,具有更高的灵敏度和选择性,适用于更为复杂的样品。
1. 样品要求
1) 粉体样品需要提供20mg以上,液体样品需要提供0.5ml以上;
2) 样品需易溶于水、甲醇或乙腈等溶剂。
2. 注意事项
1) 若样品含有无机盐离子,可自行除盐后寄样,或指定配备除盐配件的LCMS仪器。样品需要在常规溶剂中溶解性较好;
2) 所有色谱质谱类测试,涉及参数往往很多。我们会依据您的参考文献,结合实验室现存条件与经验,尽量使用相同或者相似的参数或配件。由于测试影响因素太多,没有办法保证测试参数或结果完全符合您的预期;
3) 液相色谱是室温环境测试,因此当环境条件改变时同一成分的保留时间和强度等都会有差异,因此不同批测试的数据可能没有办法进行对比;
4) 请务必如实填写是否含无机盐离子以及浓度:低于5mmol/L可以选择测试时切阀除盐,过高需要选择测试前萃取除盐。假如,部分物质含钠盐且高于5mmol/L仍选择切阀除盐时,残留的盐成分会进入离子源造成严重损害,并严重影响测试电离信号,导致质谱结果完全被盐信号覆盖,目标产物数据非常差;
5) 液质只能给出色谱(TIC总离子流图)以及质谱结果,低分辨液质无数据库,结果需要自行分析,无法进行进行数据匹配,一般能明确样品成分种类,用来定量多些,高分辨液质可进行物质检索,但需提供对应分子化学式,无分子式无法进行检索匹配;
6) 常规测试只能测一种离子模式,如果需要正+负两种模式结果,按照两个样品计费,常规测试无法准确定量,只能根据峰面积半定量分析,准确定量需提供对应的标样,标样测试等同样品收费;
7) 液相配的是紫外检测器,因此部分没有紫外吸收的材料无法检测。
测试结果
质谱是同时可以进行定量分析的,所以给出的峰面积与化合物浓度有线性关系,成正比。“产物多是否主要反应路径”和取样的时间点有关,大部分反应产物随反应时间延长而浓度逐渐增大并进入平台期或浓度下降(说明他不是最终产物)。底物浓度在逐渐降低,说明反应还未进入平台期,仍在上升期。如果反应是时间控制的,即:速率型,那产物含量多的可以判断为是主要反应途径。
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