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仪器型号:德国 leica stellaris5;蔡司Zeiss LSM 880共聚焦显微镜;德国-Leica-SP8 SR等
测试周期:3-7个工作日
激光共聚焦电镜(CLSM)
激光共聚焦扫描显微镜以激光作为激发光源,采用光源针孔与检测孔共轭聚焦技术,每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像,再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的共焦图像。把X-Y平面(焦平面)扫描与Z轴(光轴)的扫描相结合,通过累加连续层次的二维图像,经过专门的计算机软件处理,可以获得样本的三维图像。在此过程中,来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰,从而大大提高了显微图象的清晰度和细节分辨能力。 激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态,也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合焦点稳定系统可以实现长时间活细胞动态观察。
一、 菌液/污泥/污水类样品
1. 样品量
5000 rpm离心10 min,可得到绿豆大小沉淀,参考图(1.5 mL离心管)大小的菌体沉淀。
2. 寄送要求
1) 若为细菌类需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
2) 若为蛋白/多糖类染色,一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,样品不和冰袋接触。
二、 生物膜样品
1. 样品量
金属/瓷砖/岩石等块体类建议长宽高尺寸不超过1 cm,薄膜类直径尺寸不超过2 cm;且均要求样品表面平整,需要标出拍摄面。
2. 寄送要求
1) 一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
2) 若在爬片上培养生物膜,可将爬片粘于培养皿底部,充满培养基,封口膜密封完全,再4度保存。
三、 植物类
3. 说明
1) 植物类样品可进行简单冰切及刀切,软化等特殊类请走病理组织切片测试项目;
2) 一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
3) 平台做过的植物类样品淀粉、胡萝卜,土豆、叶片、根、茎,拟南芥等。
四、 需要与细胞共培养的样品
(一)块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等
1. 送样量
1) 与细胞的作用方式为直接接触的话,至少1个/种细胞/时间点;
2) 样本处理方式为浸提的话,可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提,根据浸提方式按量和检测时间点提供。
2. 制样要求
若是需要把细胞接种到材料上的话,金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为10-15 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为15 mm。
(二)液体类
1. 送样量
根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的 3-5倍的量寄送。
1) 若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及工作液浓度;
2) 若溶剂为有机溶剂(如DMSO,醇类,酚类等),最高工作液浓度中,溶剂的占比低于0.5%。
(三)粉末类
1. 送样量
根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送。
3) 若为可溶性粉末:注明溶剂的种类(如无水乙醇,异丙醇,DMSO,培养基,PBS或者生盐水等),当样品对溶剂有特殊需求时,请在送样时附加所需溶剂;
4) 若为不可溶粉末:注明样本性质,灭菌方式,及分散为均匀悬浮液所需必要步骤。
(四)无需染色直接拍摄类样品
1. 细胞类样品直接拍摄,需要封片后常温避光邮寄;
2. 固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm,厚度不超过10mm,重量不超过10g,一定标出测试面;
3. 微米材料直接拍摄类建议进行云视频沟通,且微粒尺寸不低于5微米;
4. 其他说明:
激发和发射波长说明:需要提供清楚激发/发射波长,拍摄类型2D/3D,拍摄倍数等要求。
测试结果
二维形貌
三维形貌
荧光显微镜使用的光源比激光共聚焦通能低,以短波长的紫外光为主,激光共聚焦是光源主要是激光,分辨率高,可以逐点扫描,可以做三维重构,适合多重染色的样品观察。
不是,是伪彩色,光电倍增管只检测强度信息,不检测颜色信息。颜色可以进行更改。不过可通过发射波长的范围,判断大概是什么颜色。
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