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冷冻扫描电镜(Cryo-SEM)
冷冻扫描电镜(Cryo-SEM)是基于超低温冷冻制样寄传输技术,可以直接观察液体、半液体样品;生物样品常规制样方法中干燥过程可能对含水量较高的样品产生影响,而冷冻技术能避免细胞变形,具有制样简单快速的优点;另外与同样可以观察含水样品的环境扫描电镜相比,冷冻扫描可在高真空状态下观察,提高了分辨率,并且可以对样品进行断裂,但成本和技术要求相对较高。
1. 样品要求
1) 固定好的细胞/组织样品,冰袋邮寄;
2) 新鲜取材的样品,需要干冰邮寄;
3) 液体样本寄送1mL以上,固体样本不能太大,样品台尺寸为长:2cm 宽:1cm 高:2cm;
4) EP管用封口膜封好,防止混入液体;或者用密封袋封好送样。
形貌测试(一般提供8-10张图)结果
1. 在样品台上涂抹导电炭胶,用镊子夹起样品粘在导电炭胶上; 2. 液氮雪泥速冻:将粘有样品的样品台投入液氮雪泥中速冻30s后,使用低温冷冻制备传输系统在真空状态下 将其转移至样品制备腔室进行升华镀金处理; 3. 升华和镀金:样品在-90℃升华10min之后以10mA的电流溅射镀金60s,送入扫描电镜样品室观察,冷台 温度-140℃,加速电5kv。
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